流式細(xì)胞儀是儀器設(shè)備中的生物器械，屬于分子生物范疇。 流式細(xì)胞儀已廣泛應(yīng)用于：免疫學(xué)、生物化學(xué)、生物學(xué)、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等方面的研究和臨床常規(guī)工作。具體的說，（1）免疫學(xué)用于：研究細(xì)胞周期或DNA倍體與細(xì)胞表面受體及抗原表達(dá)的關(guān)系； 進(jìn)行免疫活性細(xì)胞的分型與純化； 分析淋巴細(xì)胞亞群與疾病的關(guān)系； 免疫缺陷病如艾滋病的診斷； 器官移植后的免疫學(xué)監(jiān)測等。（2）生物學(xué)中的。
流式細(xì)胞儀是以流式細(xì)胞術(shù)為核心技術(shù)，集光學(xué)、電子學(xué)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、生物學(xué)、免疫學(xué)以及激光和計算機(jī)等多門學(xué)科和技術(shù)于一體的先進(jìn)科學(xué)技術(shù)設(shè)備。是現(xiàn)代科學(xué)研究中的先進(jìn)儀器之一，被譽(yù)為實(shí)驗(yàn)室的”CT”。流式細(xì)胞儀主要由液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測分析系統(tǒng)三部分組成。部分儀器在電子系統(tǒng)中具有分選功能，通過對粒子進(jìn)行充電和偏轉(zhuǎn)，達(dá)到對細(xì)胞的分選并分析的目的。
操作步驟：
1. 單細(xì)胞懸液的制備：將1x105~1x107的細(xì)胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘，棄上清；加入FACS緩沖液100 ul 懸浮細(xì)胞。
2. 封閉細(xì)胞表面Fc受體：在步驟1中加入Fc受體抗體0.5 ul（0.5 mg/ml），水浴3分鐘。
3. 細(xì)胞與熒光抗體結(jié)合：在步驟2中加入熒光抗體1 ul（0.5 mg/ml），水浴30分鐘。
4. 洗細(xì)胞去除游離的熒光抗體：在步驟3中加入FACS緩沖液350 ul，輕輕混勻，3000 r/min，離心5分鐘，棄上清，重復(fù)步驟（4）2次。
5. 上樣前處理：取100 ul 儀器緩沖液加入步驟（4）獲得的細(xì)胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細(xì)胞，將細(xì)胞懸液移入FACS專用管中，準(zhǔn)備進(jìn)行儀器檢測和分析。
注意事項(xiàng)
1. 減少非特異熒光染色
?。?）細(xì)胞的活性和狀態(tài)：流式細(xì)胞儀不但可探測細(xì)胞表面的熒光，也可探測細(xì)胞內(nèi)的熒光。因此，如果要檢測細(xì)胞表面的分子，一定要保證細(xì)胞的活性，還應(yīng)盡可能保持細(xì)胞靜止，通常在4度進(jìn)行操作。否則，熒光抗體進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)，會產(chǎn)生非特異結(jié)果。
?。?）封閉抗體的應(yīng)用是bi不可少的，因?yàn)榇蠖鄶?shù)的免疫細(xì)胞表面都表達(dá)有Fc-R。細(xì)胞與抗體相互作用后，一定要用FACS緩沖液洗2~3次，以除去游離的抗體。
2. 單染色時以FCS常用，F(xiàn)ITC標(biāo)記抗體熒光比較穩(wěn)定而且價格合適。
3. 如果同時要檢測兩種以上的分子，一定要選擇不同波長的熒光所標(biāo)記的抗體。
流式細(xì)胞儀是一種能夠探測和計數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞檢測裝置，由于在檢測中使用的細(xì)胞標(biāo)志示蹤物質(zhì)為熒光標(biāo)記物，因此，用來分離、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀有被稱為熒光激活細(xì)胞分類儀，是分離和鑒定細(xì)胞群及亞群的一種強(qiáng)而有力的應(yīng)用工具。
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